Détection rapide et spécifique de la résistance aux macrolides de Helicobacter pylori dans le tissu gastrique par hybridation in situ

Des chercheurs de l’Institut Max von Pettenkofer Institute d’Hygiène et Microbiologie médicale de l’Université Ludwig Maximilians de Munich rapportent dans le dernier numéro du mensuel anglais ‘Gut’ avoir développé une méthode, basée sur l’hybridation (rRNA) sur cellules entières, pour détecter in situ Helicobacter pylori au sein du tissu gastrique en même temps que son génotype de résistance à la clarithromycine.

Cette étude a été menée en collaboration avec des microbiologistes de l'Université de Freiburg et l’Université Humboldt à Berlin, ainsi que des anatomopathologistes de l’Université de Erlangen-Nürnberg.

Comme on le sait, le développement de la résistance aux macrolides de Helicobacter pylori est considéré comme la raison essentielle des échecs des traitements d’éradication. Le mécanisme prédominant de cette résistance, en particulier vis-à-vis de la clarithromycine, repose sur trois mutations déterminées au sein de l’ARNr 23S, qui entraîne une diminution de la liaison de l’antibiotique au ribosome bactérien.

Une série de sondes oligonucléotidiques fluorescentes a été développée. Elles se lient soit aux séquences ARNr 16S, soit d’ARNr 23S contenant les mutations ponctuelles responsables de la résistance à la clarithromycine.

Après hybridation et lavage, le marquage de la bactérie intacte a été révélé par microscopie par fluorescence.

La nouvelle technique a été comparée aux tests PCR, à l’histologie et aux cultures microbiologiques.

Comparé au phénotype de résistance, il ressort que la résistance génotypique pour la clarithromycine était corrélée parfaitement (100%) pour les 35 isolats de H. pylori analysés. De même, les résultats de l’hybridation in situ confirmaient correctement ceux de l’histologie.

Enfin, des formes coccoïdes non cultivables de H. pylori ont été détectées par la technique de ‘whole cell hybridisation’.

Source : Gut, 2000; 46: 608-614.