Du nouveau dans les dosages sérologiques

Des chercheurs viennent de décrire une technique innovante qui permet un dosage immunologique des protéines sériques avec une sensibilité largement améliorée par rapport aux techniques conventionnelles. Des concentrations inférieures au femtomolaire (fM, 10-15 mole.l-1) ont pu être détectées.

Outre sa sensibilité, cette technique offre l’avantage de pouvoir être facilement adaptée dans des protocoles d’analyse de routine, expliquent Zhang et collaborateurs dans leur article publié aujourd’hui dans la revue Nature Medicine.

La méthode employée par ces chercheurs s’apparente à la technique classique ELISA pour son principe mais présente une amélioration de la détection grâce à une amplification du signal. Le principe est le suivant : un anticorps dit de capture est fixé dans les puits d’une plaque d’analyse classique. Cet anticorps fixe l’antigène d’intérêt présent dans l’échantillon. Un deuxième anticorps, dit de détection et dirigé lui aussi contre l’antigène recherché, rentre en jeu et se fixe via un deuxième épitope sur l’antigène d’intérêt.

La nouveauté réside dans la fixation d’une chaîne d’ADN double brin (nommée module d’amplification) sur l’anticorps de détection. Une enzyme, la T7 RNA polymérase, est alors employée pour produire une grande quantité de copies ARN à partir de cette séquence ADN. Les copies ARN ainsi amplifiés sont alors détectés par fluorescence grâce à l’ajout d’un colorant fluorescent qui s’intercale dans l’ARN.

Les chercheurs ont nommé cette méthode « fluorescent amplification catalyzed by T7 polymerase technique (FACTT) ». Elle s’est montrée extrêmement sensible, capable de détecter la protéine Her2-Neu à une concentration 0,08 fM, un résultat supérieur à ceux obtenus par ELISA pour les antigènes rares. Par ailleurs, les auteurs ajoutent que la FACTT a permis de détecter d’autres protéines (protéine prion, TNF-alpha, G-CSF) avec une sensibilité 1000 à 10000 fois supérieure à celle de l’ELISA. Ces derniers résultats feront l’objet d’une autre publication scientifique, expliquent les chercheurs.

Source : NATURE MEDICINE ADVANCE ONLINE PUBLICATION, published online 12 March 2006; doi:10.1038/nm1378

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